品牌商
爱必信(上海)生物科技有限公司
入驻年限：12 年
- 联系人：
爱必信
- 所在地区：
上海
- 业务范围：
抗体、试剂、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、技术服务
- 经营模式：
生产厂商
推荐产品
技术资料/正文
免疫组化步骤详解剖析（一）
297 人阅读发布时间：2022-12-21 15:23
1、标本固定：
固定的目的是
①防止标本从玻片上脱落；
②除去防碍抗原—抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；
③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用 4%多聚甲醛。
2、脱水、石蜡包埋和制片：
脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则容易裂片和脱片等。
3、脱蜡和水化：
这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分别10min，但当天制好的切片可以60度3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。
4、抗原修复：
由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；因此要进行抗原修复。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。常用的修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。
5、细胞通透：
目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。一般用Triton X-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
6、灭活内源性过氧化物酶和生物素：
在传统的ABC法和SP法中，免疫组化反应结果容易收到内源性过氧化物酶和生物素的干扰，必须用过氧化氢和卵白素等进行灭活。灭活内源性POD一般3%过氧化氢灭活时间短点，而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间。
固定的目的是
①防止标本从玻片上脱落；
②除去防碍抗原—抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；
③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用 4%多聚甲醛。
2、脱水、石蜡包埋和制片：
脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则容易裂片和脱片等。
3、脱蜡和水化：
这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分别10min，但当天制好的切片可以60度3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。
4、抗原修复：
由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；因此要进行抗原修复。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。常用的修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。
5、细胞通透：
目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。一般用Triton X-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
6、灭活内源性过氧化物酶和生物素：
在传统的ABC法和SP法中，免疫组化反应结果容易收到内源性过氧化物酶和生物素的干扰，必须用过氧化氢和卵白素等进行灭活。灭活内源性POD一般3%过氧化氢灭活时间短点，而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间。
询价列表
暂时没有已询价产品
快捷询价 发送名片
当你希望让更多商家联系你时，可以勾选后发送询价，平台会将你的询价消息推荐给更多商家。