类器官原代培养要素剖析

一、组织样本

1、组织活性程度

（1）组织活性不足是占构建失败八成以上的原因。如何区分组织活性状态，我们从下面这组对比判断。

（2）转移性的类器官增殖活性比较强

人结直肠癌肝转移

转移性的类器官用原发或转移组织类器官培养基都可以养，此图用的肝胆管癌类器官试剂盒（ abs9786 ）

（3）新鲜和坏死组织是怎样的呢?我们可以通过图片来对比

坏死肝癌组织

豆腐脑状，瘫软，发黑，癌细胞少，癌干活性低

活性好的肝癌组织

细胞团不但少，还呈坏死样，发黑，红色圈出来的是细胞团

活性好的乳腺癌组织消化效果好的镜下图

红色圈出来的是细胞团

小鼠正常肝组织消化后红细胞镜下图

图中红细胞过多（圆盘状，中间凹），在消化过滤离心后，建议加入3mL红细胞裂解液（abs9101），裂解2—3分钟，9倍类类器官原代培养缓冲液（abs9731）稀释，300g，4℃离心5分钟，去上清加胶。

2. 组织量大小

组织量过少会导致消化下来的细胞量较少，养出来的类器官会又少又小，以下是对组织最少量的要求。

（1）手术标本：至少50mg，约1粒黄豆大小；如果是鸡蛋大小，于肿瘤边缘，12点、3点、6点、9点方向，各取一块。最好是未经化疗或放疗的组织，非纤维化激化灶。

（2）穿刺、镜检：穿刺1－2条，2cm， 必须穿刺到肿瘤组织；镜检样本（至少10mg）。

（3）恶性积液：恶心积液至少50mL。

（4）样本运输及保存：取出后迅速置于组织保存液中，冰袋运输，4℃保存，当天做最佳，最晚不超过48小时；

组织的采集、保存、运输要保证无菌条件和活性维持，以下是总结的条件

注意无菌性：

（1）为预防污染，可在组织保存液（abs9784）中加入1%双抗（abs9244）；

（2）组织保存液体积要能浸没整个组织，一般5-10ml；

（3）取样瓶要保证无菌，也可以用15mL或50mL无菌离心管当取样管；

（4）用酒精棉消毒过的镊子将组织放入含有组织保存液的取样瓶中；

（5）手术切除的组织需立即转入含有组织保存液无菌取样瓶中。

保存及运输条件：

（1）4℃保存，冰袋运输；

（2）越早做，成功率越高，当天做最佳，最晚不超过48小时。

好的组织消化酶能够高效分离细胞，爱必信有多款组织消化酶，通常在15-30分钟就可以完成组织的消化解离，使原代操作1小时内完成。

原代组织消化液（abs9522）

提高原代培养效率：在37℃进行消化15-30min（最常不超过30分钟），消化过程中随时观察消化情况，及时终止。

培养基在对类器官增殖至关重要。如果培养基因子因活力不够，往往导致类器官增殖缓慢，个头偏小。因此，自行配置类器官培养基要选择高活性因子，选择商品化类器官培养基要认准品质。基质胶在类器官增殖过程中提供支架支持，同时也提供少量但全面的生长因子支持。爱必信提供的类器官培养基是完全型（因子已经加到基础培养基里面）、即用型；提供的基质胶是分装型（1.5mL装）、即用型，方便大家使用。

组织剪切不充分，细胞就不容易解离下来，而通过延长时间又会导致细胞活力下降。
（1）通常，我们建议把组织减到肉眼看呈小点状为止（建议在EP管里剪切更容易，太稠不好观察，可以加一点缓冲液稀释一下再观察）；

在组织消化过程中，要取样镜检消化效果，通过以下几张图给大家展示如何判断消化程度。

消化状态差的镜下图

组织剪切不充分，消化时间短，细胞团较少

取样不好的组织镜下图

吸取的组织呈糜烂状，镜检图片往往呈现浑浊雾状

消化效果好的结直肠癌镜下图

镜检图里密密麻麻的细胞团，这个状态可以终止消化了

消化效果好的结直肠癌镜下图

红色圈出来的是细胞团

红色圈出来的是细胞团，细胞团交错分布不重叠

今天讲解就到这了，大家如有实验问题，欢迎入群交流哦！

注：文中部分图片源于客户提供，感谢支持！如有侵权，联系删。

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