解锁线粒体研究密码：这款mtDNA提取试剂盒，让实验效率翻倍！

作为细胞内的“能量工厂”，线粒体早已不止于“供能者”的身份。2025年多项重磅研究证实，线粒体的功能异常与肿瘤转移、糖尿病进展、衰老加速及遗传性神经肌肉疾病密切相关——癌细胞可通过夺取神经细胞线粒体增强转移能力，修复线粒体损伤能逆转胰岛β细胞功能障碍，而线粒体DNA（mtDNA）的突变图谱更是成为疾病预警的新型生物标志物。从基础科研的分子进化分析，到临床转化的基因治疗探索，mtDNA都是不可或缺的核心研究对象。

mtDNA作为独立于核基因组的环状遗传物质，具有母系遗传、突变率高、拷贝数多的独特特性，其研究价值不言而喻。

若想要精准解析mtDNA的功能与变异，首要前提是获得高纯度、无核DNA污染、完整度佳的样本。因此，选择一套高效可靠的mtDNA提取方案，是线粒体研究成功的关键第一步。

目前常用的mtDNA提取方法各有局限，难以兼顾效率、纯度与便捷性：

- 氯化铯密度梯度离心法：虽能获得高纯度mtDNA，但需昂贵专用设备，离心耗时久，操作复杂，且乙啶溴具有致癌性，仅适用于少量样本的精细提取，无法满足常规实验需求。

- Triton法：借助非离子去污剂裂解细胞，但核DNA去除不彻底，易造成污染，后续PCR、基因编辑等实验准确性受影响，且对操作手法要求严苛。

- 传统沉淀法：步骤繁琐，需多次酚lu仿（有毒试剂）抽提，不仅耗时（全程需3小时以上），还会导致mtDNA大量流失，得率偏低，同时易引入有机试剂污染。

针对这些痛点，爱必信线的粒体DNA提取试剂盒（abs50137），现货供应，适用于动物组织和培养细胞，融合差速离心与柱层析核心技术，兼顾便捷性、高纯度与高得率，轻松解决传统方法的诸多难题，为线粒体研究保驾护航。

1. 无核污染，纯度拉满：采用“差速离心富集线粒体+DNase I定向消化核DNA”双重去污染机制，搭配专用裂解缓冲系统，可高效去除核DNA与numts干扰，纯化后mtDNA纯度达OD260/280=1.8-2.0，可直接用于PCR、基因编辑、Southern blotting等对纯度要求高的实验。

2. 快速高效，省时省力：简化实验流程，全程仅需1个多小时可完成提取实验，试剂盒中有所有配套试剂，新手也能轻松上手，大幅提升实验效率。

一步一指南，轻松掌握mtDNA提取流程

准备工作：在DNA 酶I 中加入600uL（50T）或者1100uL（100T）的DNA 酶反应液，适当分装后-20℃保存。 线粒体裂解液保存于常温，如有沉淀37℃水浴溶解，离心机温度下降到4℃（2-8℃），如无低温离心机，也可以常温离心，并将离心时间为10min的改为5min，但最后所得DNA 品质及产量可能会有一定影响。

1、样本处理

（1）组织匀浆：称取100~200 mg 新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS 或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL 冰预冷的细胞裂解液，0℃冰浴上下研磨组织20 次；

（2）培养细胞匀浆：消化细胞，PBS 洗涤，800×g 离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5×10⁷ 个细胞，加入1.0 mL 冰预冷的细胞裂解液重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40 次；

PS: 全程低温快速操作(手动匀浆)，避免线粒体膜损伤与mtDNA降解；

2、将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；

3、取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min； 

4、取上清，加入一新的离心管中，4℃，12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；

5、在线粒体沉淀中加入5 mL线粒体清洗液重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min；

6、取上清，加入一新的离心管中，4℃，12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；

7、加入100μL DNA 酶反应液重悬线粒体，吹打均匀后，再加入10μL DNase I 溶液（见准备工作），混匀，37度水浴10min。此步为消化线粒体表面吸附的核DNA。4℃，12,000 × g 离心5 min。尽可能的弃上清，再加入 200μL TE缓冲液重悬线粒体沉淀，12,000 × g 离心5 min，洗去残留的DNA 酶。

8、得到的沉淀，用200μL TE缓冲液重悬线粒体沉淀。加入10μL RNase A。加入200μL 线粒体裂解液，轻轻混匀（不可吹打），放置1-2min 左右，不超过5min，再加入150μL 蛋白沉淀液，迅速混匀。4℃，12,000 × g 离心5 min。此步骤可进一步去除核DNA。

9、取上清，加入一新的离心管中（如用于酶切分析，可加入此步：可选用等体积的酚lu仿yi戊醇25:24:1 抽提一次，再用lu仿抽提一次，或者直接用lu仿抽提两次，一般来说，此步可去掉一些微量蛋白及糖类，但会造成线粒体DNA的损失，因而用于PCR 时可省，并不影响后续实验），加入6 倍体积的异丙醇（如无异丙醇，可加入2.5 倍体积的乙醇沉淀DNA，如离心管太满可分两管）及5-10μL核酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右（此步可省），4℃，12,000 × g 离心10 min。

10、弃上清，再加入1ml 70%乙醇清洗，4℃，12,000 × g 离心10 min。重复用70%乙醇洗一次。

11、弃上清，再次离心1min 吸弃上清，不要碰到管底，开盖晾干约5-10 min。

12、加入20-30μL TE 缓冲液（线粒体DNA长期储存（大于一周），建议用TE缓冲液溶解；如时间短，可用超纯水），轻弹管底，37 ℃水浴5 分钟，线粒体DNA溶解。

13、进行DNA 电泳检测及-20 ℃保存，进行下步的实验

PS：线粒体DNA 本身含量很低，如果电泳检测不到，可加大上样量，用更少量的TE 溶解沉淀，或者直接进入PCR 检测。

从基础科研到临床转化，高质量的mtDNA样本是突破研究瓶颈的关键。这款高效mtDNA提取试剂盒，以精准去污染、快速便捷、稳定可靠的核心优势，成为线粒体研究的得力助手。让每一次提取都精准高效，让每一组数据都真实可信，助力你的研究更快取得突破性进展！

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