做炎症性肠病（IBD）基础研究的小伙伴，是不是总被这些问题卡住：造模方案怎么定？表型评价用什么指标？机制研究从哪下手？试剂清单怎么列？
今天直接给你一套从上游造模到下游机制验证的完整 IBD 实验体系，DSS 溃疡性结肠炎、TNBS 克罗恩病双模型全覆盖，思路 + 试剂一步到位，课题申报、实验设计、论文写作直接套用！
一、整体实验逻辑：上游 - 中游 - 下游，闭环研究不踩坑
做 IBD 实验，核心就是「造模 - 评价 - 机制」三步走，逻辑清晰，层层递进：
- 上游：造模：构建急性 / 慢性肠炎模型（DSS/TNBS 双模型可选）
- 中游：表型评价：用 DAI 指数等指标明确疾病活动度，验证造模成功 + 药物疗效
- 下游：机制验证：从炎症、肠屏障、免疫、菌群四大维度，深挖作用靶点
二、上游：IBD 造模设计，三种经典模型直接照搬
1. 常用模型怎么选？
| 模型类型 | 适用场景 | 核心特点 |
|---|---|---|
| DSS 诱导 UC 模型 | 溃疡性结肠炎（最常用） | 操作简单、周期短、重复性好，C57BL/6、BALB/c 小鼠通用 |
| TNBS 诱导 CD 模型 | 克罗恩病 | T 细胞介导，更偏向免疫机制，模拟 CD 的透壁性炎症 |
| 慢性 DSS 模型 | 复发性肠炎 | 循环 DSS→清水→DSS，模拟临床反复发作的病程 |
2. DSS 急性肠炎标准方案（直接用）
- 动物选择：6-8 周雌性小鼠（个体差异小，造模更稳定）
- 分组设计：正常对照组、模型组、药物低 / 中 / 高剂量组、阳性药组（5-ASA、地塞米松等）
- 造模流程：3%-5% DSS 水溶液自由饮用 5-7 天，之后改正常饮水，观察至 Day 10-14
- 每日监测：体重、便血、粪便性状、存活率，为 DAI 评分做准备
3. DSS 急性结肠炎类器官标准方案（直接用）
传代后的类器官，在day2-3，类器官雏形出现（囊泡出现），用含有20μg/mL DSS的类器官培养基连续处理120h，期间每2天换一次DSS的类器官培养基。
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文献支持
【1】Cancer Res.2026 Feb 9.doi: 10.1158/0008-5472.CAN-25-2586. IF:16.6
【2】Gut Microbes.2026 Dec 31;18(1):2639216.doi: 10.1080/19490976.2026.2639216.IF:11
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【5】Redox Biol.2024 Nov:77:103370.doi: 10.1016/j.redox,2024.103370.IF:5.7
三、中游：疾病活动度评价（DAI），造模成功金标准
疾病活动指数 DAI是 IBD 实验的核心评价指标，公式直接用：
DAI = 体重下降评分 + 便血评分 + 粪便性状评分
每项 0-4 分，总分 0-12 分，分数越高，炎症越严重
同时配套检测，多维度验证造模效果：
- 结肠长度：炎症越重，结肠缩短越明显
- 脾脏指数：脾脏增大提示全身炎症激活
- 存活率：直观反映造模严重程度与药物保护效果
结肠炎类器官验证
1、明场验证
每天记录Control（非炎症诱导组）和Modle（炎症诱导组）的类器官明场照片和视频。
视频显示：与Control相比，Modle类器官形态结构松散，膨大。
明场图显示：与Control相比，Modle类器官壁明显增厚。
2、HE染色
H＆E显示：与Control相比，Model类器官壁增厚，上皮排布紊乱，且存在一定程度增生和胞内囊泡结构。
3、类器官活死染
活死染显示：与Control相比，Model类器官活性有所减弱。
4、FITC葡聚糖荧光染色
FITC葡聚糖荧光染色：与Control相比，Model类器官通透性增强。
5、IL-6和TNF-α检测
IL-6和TNF-α检测显示：与Control相比，Model类器官通透性增强，Modle组ELISA检测IL-6显著升高，图 (A)；Modle组ELISA检测TNF-α显著升高，图 (B)。
总结：通过对Control（非炎症诱导组）和Modle（炎症诱导组）的指标对比，从明场验证、HE染色、类器官活死染、FITC葡聚糖荧光染色、IL-6和TNF-α检测等指标检测，可以验证Modle炎症诱导成功。
四、下游：机制实验全套设计，四大维度全覆盖
1. 组织病理：直观验证炎症损伤
- 结肠 HE 染色：评估炎性浸润、隐窝破坏、溃疡程度
- 结肠 AB-PAS 染色：观察黏液分泌、杯状细胞数量，反映肠黏膜屏障
- 免疫组化 / 免疫荧光：
- 肠屏障：ZO-1、Occludin 紧密连接蛋白
- 免疫细胞：CD4、F4/80、MPO 浸润情况
- 细胞增殖 / 凋亡：Ki67、TUNEL 染色
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文献支持
【1】AdvSci (Weinh).2024 Dec 24;12(7):2409537.doi:10.1002/advs.202409537.IF:17.5
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【6】Cel. 2025 Mar 3.doi:10.1016/j.cell.2025.02.002.IF:42.5
2. 炎症因子：核心炎症通路验证
- ELISA/CBA/ 多因子检测：TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IFN-γ、IL-10、IL-23
- qPCR：检测结肠组织炎症相关基因 mRNA 表达
3. 肠屏障功能：IBD 核心靶点研究
- 血清内毒素（LPS）：反映肠道通透性
- FD4 通透性实验：异硫氰酸荧光素 - 葡聚糖灌胃，检测肠道屏障完整性
- 紧密连接蛋白：ZO-1、Occludin、Claudin 蛋白表达检测
4. 氧化应激：炎症损伤的重要推手
- 氧化应激指标：MDA、SOD、GSH-Px、CAT 检测
- iNOS、ROS 相关指标：评估氧化损伤程度
5. 肠道菌群：IBD 发病的关键环境因素
- 16S rRNA 测序：分析肠道菌群组成与多样性
- 宏基因组 / 代谢组：深挖菌群功能与代谢产物
- 短链脂肪酸（SCFA）：乙酸、丙suan、丁suan检测，反映菌群代谢功能
6. 免疫细胞（流式）：免疫失衡机制验证
- 肠系膜淋巴结 MLNL、结肠固有层 LPMC 细胞分离
- 流式检测：Th1、Th17、Treg、巨噬细胞 M1/M2 比例，解析免疫调控机制
写在最后
这套方案覆盖了 IBD 基础研究的全流程设计，从造模到机制，从表型到分子，不管是做课题申报、实验设计还是论文写作，都能直接套用！再也不用到处查文献、凑方案，一套搞定 DSS/TNBS 双模型，炎症、屏障、免疫、菌群四大机制方向全涵盖，实验人直接抄作业！