超越四聚体，从识别到“真杀伤”|肿瘤T细胞检测新高度

在肿瘤免疫研究与治疗领域，什么样的T细胞最有价值？不是“和抗原结合”的，而是真正“能杀死肿瘤”的那一群！爱必信（Absin）以全抗原纳米颗粒为创新核心，推出更精准的效应型肿瘤抗原特异性T细胞（effector tumor antigen-specific T cells，ETASTs）检测方案，直击传统方法的局限，让功能读出成为疗效评估和基础研究的新基石。

一、传统检测方法的痛点

1）MHC四聚体：

MHC四聚体通过抗原肽-MHC复合物识别TCR，虽具有高度特异性和经典地位，但在临床与基础应用中存在根本性局限。

首先，TCR与MHC-肽复合物的“配对”仅代表潜在识别，并不能直接反映T细胞是否具备激活及杀伤功能——大量四聚体阳性群体实际上处于功能低下或耗竭状态，缺乏真正的效应性。

其次，该方法受限于HLA型和指定少数表位肽库，导致个体差异大、谱系覆盖面狭窄，难以适用于复杂异质性肿瘤微环境。肿瘤相关表位极为多样，而四聚体技术仅能检测有限“已知靶点”，无法响应新生抗原、多肽表位或突变抗原。

并且技术上，四聚体制备和筛选流程繁琐，成本高，限制了高通量和个体化检测的推广。更为重要的是，四聚体信号受TCR亲和力、表面表达密度、与共刺激信号等多因素交互影响，信号强度未必等同于免疫效能，高比例的“假阳性”或“功能盲区”不利于预判治疗效果。因此，MHC四聚体法在实际选出真正有抗肿瘤效应的T细胞时，准确性和临床价值受到显著挑战。

2）功能检测（如ELISPOT、ICS）：

功能检测依赖短时体外刺激捕捉细胞因子/脱颗粒等信号，虽能提示应答存在，但与体内杀伤效能与持续性并不等价。

首先，读出为瞬时状态且高度依赖刺激配方、浓度与时长，跨批次与阈值判定差异大，易致假阳性/假阴性。

其次，对抗原依赖强，多用已知肽池或非生理强刺激（PMA/ionomycin），既可能绕开TCR特异性，又难覆盖新生抗原与复杂表位，导致反应被低估或失真。

其三，ELISPOT多为单/低通量指标，仅给频次不反映单细胞强度；ICS需固定通透、细胞不可回收且面板补偿复杂、背景升高，限制了表型-功能一体化分析与后续验证。技术上，功能读出与真正细胞毒性并不直接对应，常需结合CD107a、GzmB/Perforin或独立杀伤实验方可间接推断。

并且在样本学方面，低频应答对细胞活性与APC/HLA条件极为敏感，TIL耗竭、冷冻复苏或运输延迟均显著降低检出率。

综上，功能检测更适合作为“是否被激活”的近端证据，难单独甄别“真杀伤、可持续”的抗肿瘤T细胞，需与更接近真实抗原谱与功能状态的策略联合使用。

3）局限总结：

肿瘤因其抗原异质性高，单一表位方案天然“看不全”，假阴性导致易错过潜在治疗靶点；而单一功能结合导致很多标志阳性T细胞实际无杀伤力。

二、Absin创新方案的突破

全抗原纳米颗粒技术：

基于肿瘤全抗原纳米颗粒的Absin检测策略以体外功能激活为核心，克服了上述不足。

首先，纳米颗粒可高效负载肿瘤来源的完整抗原组，无需肽表位预设，尽可能复现真实肿瘤异质性和个体新生抗原背景，大幅提升检测的广谱性和灵敏度。

其次，该方法通过体外激活诱导T细胞真实表达功能型分子（如CD137、IFN-γ等），仅筛选出那些被肿瘤抗原激发、具备分泌、杀伤能力的活性T细胞，杜绝“表面阳性实质无效应”现象，检测结果与免疫效应紧密正相关。

再者，全抗原纳米颗粒法可完全跳开HLA限制，不依赖个体特异性复合物合成，极大简化流程，适用于各类肿瘤患者以及多物种模型，高度便捷。

最后，该策略支持多分子流式标记、门控和功能分型，能动态量化应答强度，实现疗效预测与伴随诊断。

图1：肿瘤组织全抗原纳米颗粒，可以更真实全面的激活体内ETASTs

三、基础流程与易用性

1）外周血采集或组织消化获取单细胞；

2）与全抗原纳米颗粒共孵育，体外激活T细胞；

3）进行流式染色抗体分型，多分子门控分析激活状态；

4）结果报告：即刻呈现实验组与对照组“真效应”细胞的定量数据。

图2：检测流程简图——从样本到功能

四、小结与常见问题

Q：这套方法检测出来的T细胞比四聚体更多吗？

A：能覆盖更多抗原表位，且识别的是具有杀伤能力的功能型细胞。

Q：真能预测疗效吗？

A：多中心研究表明ETASTs水平与免疫治疗应答密切相关，AUC最高可达0.95

Q：对样本类型有什么要求？

A：外周血5 mL即可，多时点重复可追踪动态趋势。

注：本方案及产品仅限科研用途，不做临床/个体诊断之依据

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