近期很多老师发图咨询细胞培养时背景的“颗粒”是不是污染，如何去除？今天这篇文章小编带大家全面解析细胞培养中出现的“颗粒”问题。细胞培养中常见的“颗粒”可分为胞内和胞外两种，下面两张图可以直观地向大家展示：

 

很多老师因为不清除这些“颗粒”的来源，害怕污染而将细胞丢弃，不仅浪费心力，还耽误实验进度，接下来我们逐步分析这些“颗粒”产生的原因。

 

1、细菌或真菌污染

图3  污染的细胞

 

真菌污染相对来说比较好鉴别，一般肉眼可见培养基上层漂浮的霉斑或显微镜下可见菌体，细菌的菌体相对较小，显微镜下呈棒状、球状或者杆状，由于细菌增值产生酸性物质，短期内培养基变黄，浑浊，细沙状沉淀。

 

2、细胞碎片

图4 细胞碎片和细菌区别

 

消化不当或者PH、渗透压、温度的变动可能引起细胞死亡，产生碎片，如何对细菌和细胞碎片辨别？有困难的老师，可以登录爱必信官网-产品资讯处或者关注爱必信公众号查看往期文章“手把手教您识别细菌污染”。

 

3、凋亡小体

图5 程序性死亡未释放和正在释放的凋亡小体

 

程序性死亡细胞的核DNA在核小体连接处断裂成核小体片段，形成浓缩的染色质块。随着染色质不断聚集，核膜在核孔处断裂，形成核碎片。同时由于不断脱水，细胞质不断浓缩，细胞体积减小。整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一个球形的突起，并在其根部绞窄而脱落形成一些大小不等，内含胞质、细胞器及核碎片的小体称为凋亡小体。

 

4、支原体集落

 

支原体无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器，单个的支原体无法显微镜观察，目前已知的主要污染源是动物血清、胰酶和已污染培养物的气溶胶。来源广泛、不易过滤、难以观察，给细胞培养带来了极大隐患。单个的支原体无法从显微镜下观察，支原体集落却可以被捕捉到。

图6 被支原体集落“附身”的细胞

 

5、黑胶虫

 

谈到黑胶虫，大家应该都对他神秘的“身世”有印象，目前多数黑胶虫被鉴定为细菌，黑胶虫最明显的特征是运动，但是这里小编要提醒大家，支原体集落，可能也会出现运动的现象，详细的讲述可以查看往期文章。“探秘黑胶虫（上）”、“探秘黑胶虫（下）”

 

6、血清中的物质

 

血清反复冻融或者经过灭活后，可能会产生“小黑点”，此外不要认为会增多的一定是微生物污染，血清质量不好，影响细胞生长，衰老细胞增多形成细胞碎片，也会呈现细胞长势不佳，黑点增多的现象。

 

经过分析，许多老师肯定又觉得混乱，细胞培养遇到“颗粒”到底如何应对？

 

首先，如果是微生物污染，不重要或者可替代的细胞，我们都建议丢弃，并排查污染来源，被污染的试剂也要丢弃，并且对使用的仪器和环境进行除菌，比较重要的细胞，可以用含抗生素的缓冲液清洗过后，使用含较高浓度双抗或三抗培养，尝试消除，对于支原体和黑胶虫污染，使用相应的支原体清除剂和黑胶虫清除剂进行处理。

图7 爱必信污染清除系列产品

 

其他情况我们建议优先排查血清质量，特别是更换血清批次的，选择质量好的血清也是细胞培养成功与否的关键所在，除非实验特殊要求，其他情况下，不建议对血清进行灭活处理。而细胞正常凋亡产生的碎片，可以低俗离心分离完整细胞和细胞碎片，参考条件为300-500rpm 3min，根据实际情况进行调整，可以用缓冲液清洗几次。

图8 爱必信胎牛血清

 

最后需要注意的是某些细胞正常培养过程中会出现一些“颗粒”物质，属于正常现象，老师们一定要多查阅资料，熟悉培养细胞的特性。

 

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* 本文图片来自网络，仅供学习参考用

 

 

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