爱必信(上海)生物科技有限公司
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多色类器官宝典:肺癌类器官的培养与多色鉴定
人阅读 发布时间:2023-05-17 17:19
一、肺癌类器官构建——Organotial人肺癌类器官培养基试剂盒(abs9443)
(1)取材后的组织须放在预冷的(2-8°C)组织保存液的取样瓶中,快速转运至洁净实验室进行组织处理和细胞分离,拍照并登记信息。
(2)准备若干培养皿,加入 4℃预冷的原代培养缓冲液备用。
(3)取样瓶消毒,将组织放入培养皿中,利用原代培养缓冲液清洗三次后,去除杂质,利用眼科剪或手术刀将组织剪切成体积约为1-3mm3的组织块。
(4)组织用人肺癌原代组织消化液消化,37℃震荡消化10-20min(消化过程中随时观察消化情况)。
(5)取少量液体在显微镜下观察,镜下观察到较多的单个细胞或70um以下的细胞簇后,加入三倍体积原代培养缓冲液终止消化。
(6)使用100um孔径的筛网(abs7009)进行过滤,将滤液收集后,于300g富集离心5min后移去上清,添加原代培养缓冲液重新重悬离心。
(7)基质胶计算:第6步后观察收集到的组织体积,添加25倍组织体积的基质胶(abs9495)重悬铺板。
(8)24孔细胞培养板为例,每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板(4℃下操作)。
(9)将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶,添加人肺癌类器官培养基(恢复室温)进行培养。二、多重荧光免疫组化鉴定——六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(abs50014)
(1)样本制备:类器官样本制备,参考类器官实操大本营之——固定包埋
(2)烤片:60℃烤片30min。
(3)脱蜡、水化:DMB(5min)——DMB(5min)——DMB(5min)——100%乙醇(5min)——100%乙醇(5min)——95%乙醇(3min)——85%乙醇(3min)——75%乙醇(3min)——去离子水(5min)。
(4)抗原修复:取200ml抗原修复液,加入染色盒中,将组织切片置于染色盒内耐高温塑料切片架上,置于高压锅内加热至饱压,然后继续加热5min,关闭电源,10min后取出染色盒,室温冷却30min,画上阻水圈,置入PBST浸洗3次,每次3min。
(5)阻断内源性过氧化物酶:每切片加100μL3% H2O2,室温下孵育10min,PBST浸洗3min×3次。
(6)封闭:除去PBST液,每张切片加100μL 5% 山羊血清封闭液,室温孵育30min,除去封闭液。
(7)一抗孵育:每张切片加100μL一抗工作液,室温保湿孵育1h,PBST浸洗3min×3次。
(8)二抗孵育:除去PBST,每张切片加100μL二抗,室温保湿孵育15min,PBST浸洗3次,每次3min。
(9)染料孵育:除去PBST,每张切片加100μL现配的1*染料工作液(使用信号放大液按1:100稀释),孵育10min后,置入PBST内洗涤,室温浸片洗涤3次,每次3min。
(10)抗体洗脱:抗体洗脱液(abs994)37℃ 预热,滴加少量抗体洗脱液覆盖样本,室温放置3~5min;弃去洗脱液,再次滴加足量的洗脱液覆盖样本,37°C 孵育20min;PBST浸洗3次,每次3min。
(11)重复步骤(6)-(10),直至所有目标抗体染色完成。
(12)核染:滴加1*DAPI工作液到样品上,浸没样本区域,室温孵育10min后,用1*PBST浸洗玻片3次,每次2min。
(13)封片:滴加抗荧光淬灭封片剂,用盖玻片封片,避免气泡。
(14)扫描成像,数据分析。
Absin肺癌类器官多色风采展
表1 小爱产品推荐
类器官培养 |
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货号 |
品名 |
规格 |
货期 |
Organotial人肺癌类器官培养基试剂盒 |
1kit |
1-2周 |
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100um细胞过滤器(160目,黄色) |
100个/箱 |
现货 |
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基质胶(低因子、无酚红) |
1.5ml*4 |
现货 |
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标准透明24孔细胞培养板 |
50个/盒 |
现货 |
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琼脂糖 |
100g |
现货 |
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多重荧光免疫组化鉴定 |
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六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔通用二抗) |
20T/100T |
现货 |
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EDTA抗原修复液(50×) |
100ml |
现货 |
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柠檬酸钠抗原修复液(50×) |
100ml |
现货 |
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过氧化物酶封闭液(H2O2法) |
100ml |
现货 |
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山羊血清 |
10ml/50ml |
现货 |
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TTF-1、Napsin A、p63、p40...(爱必信组化专用抗体) |
100ul |
1-2周 |
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一抗二抗稀释液 |
100ml/1L |
现货 |
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PBST(1×,pH7.4) |
500ml |
现货 |
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