细胞培养小分子药物配制方法解析

科研实验中我们经常需要配制各种浓度的试剂。例如细胞实验一般需要加入小分子激动剂/抑制剂；分子转化实验一般会加入抗生素；免疫实验需要加入免疫刺激物/免疫佐剂等。这些昂贵的试剂浓度一旦计算错误，不仅挑灯夜战得来的数据毁于一旦，早日发文的愿望也随之破灭，可谓一失足成千古恨。今天小爱就为大家解决这一难题，让我们学会快速换算试剂浓度，摆脱科研失误。
 

案例一

抑制剂储存液配制

我们买来的小分子抑制剂一般是冻干粉，需要把它配制成溶液。首先，我们应该知道药物的分子量、溶解度以及规格。如果是毫克级小包装，一般不需要称量分装，直接在原瓶中溶解配成储存液。
 

以 ROCK 抑制剂 Y-27632 为例，产品信息如下：

该药物推荐溶剂 DMSO，同时，最大只能配成 129.38mM 的储存液。这一点非常重要。有些人没有注意药物溶解性，直接在非水溶性药物中加入 PBS 配置，结果药物不溶，「损失惨重」。

假如我们需要配置 10mM 储存液，计算公式如下：
 

   质量（mg）= 浓度（mM）x 体积（L）x 分子量  （1）
5（mg）= 10（mM）x ?（L）x 247.34

即向含 5mg Y-27632 的原瓶中加入 2.02mL DMSO，即可配制成 10mM 溶液。（注：此处要预估原瓶的容量，如果原瓶容量小于 2 mL，应考虑配置更大浓度的储存液，如 20mM，加入 1.01 mL DMSO）。
 

此外，我们也会经常遇到质量浓度和摩尔浓度单位转换，同样以 10mM Y-27632 为例：
 

浓度快速换算法则：

1）mM 转换 mg/mL，摩尔浓度数值乘以分子量再除以 1000；
2）mg/mL 转换 mM，质量浓度数值除以分子量再乘以 1000。
 

案例二

抑制剂储存液稀释

我们买来抑制剂的冻干粉，配制储存液的浓度为10mM，如果需要使用终浓度为 25uM 进行细胞实验，需要加入多少抑制剂储存液呢？记住下面这个稀释公式就可以了：
 

起始浓度 x 起始体积 = 最终浓度 x 最终体积

   C1（mM） x V1（mL）= C2（mM）x V2（mL） （2）

即我们需要吸取 5uL 的储存液进行实验操作。
 

案例三

百分比浓度换算

我们在使用二硫苏糖醇(DTT)做实验时，会遇到这样的问题：已发表的文献中使用 0.1% 的 DTT 溶液，而你购买的 DTT为1mol/L 的储存液，那么这该如何换算呢？请听小爱为您解答：
 

DTT 的分子量为 154，即 154g/mol，储存液换算成质量浓度 C1 为
154g/mol x 1mol/L = 154g/L
 

假设需配制 1L 的 0.1%DTT 溶液，即 V2 = 1L = 1000mL

0.1% DTT 溶液为 0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L，即 C2 = 1g/L

再使用公式（2）C1 x V1 = C2 x V2 可得：
154（g/L）x V1（L）= 1（g/L）x 1（L）

V1 = 6.5mL，即吸取 6.5mL 1mol/L 的 DTT 储存液，加入 993.5mL 稀释液中即可获得 0.1% 的 DTT 溶液。
 

如果我们购买的是固体二硫苏糖醇，配制 0.1% 的 DTT 溶液方法如下：精确称取 1g 二硫苏糖醇，用水定容至 1000mL 即可。

DL-二硫苏糖醇科普

DL-二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol，DTT)具有很强的还原性，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。DTT 有抗氧化作用，它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。DTT 中还含有一定 RNA 酶抑制剂，具有抑制 RNA 酶活性的作用。具有巯基乙醇相似的作用，但 DTT 的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。用作蛋白质巯基保护剂和蛋白质二硫键的裂解和顺序分析。

DL-二硫苏糖醇应用：
 

※ 作为牛奶中主要过敏原 αs1-酪蛋白的还原和烷基化反应物之一；

※ 作为精子去膜和再激活培养基的一个组分；

※ 因硫醇可有效保护生物催化剂的活性位点而维持酶的稳定性；

※ 作为还原剂用于测试 N-乙基马来酰亚胺与巯基反应的特异性。

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