假如有人问，如何得到完美的IHC结果？大部分人的第一反应是一抗要选好，但其实除此之外，实验过程中有一些“不起眼”的小步骤，往往才是决定实验成败的关键螺丝，今天小编想聊的就是抗体的最佳拍档——抗体稀释液。

稀释液的差异会增强或减弱抗体与靶标之间的特异性相互作用，甚至影响抗体的稳定性，常见的抗体稀释液有PBST、TBST、PBS、TBS等等，为了更精准地选择，首先就要得知它们的区别。
 

缓冲液	PBST	PBS	TBS	TBST
成分	Na2HPO4 KH2PO4 NaCl KCl Tween-20	Na2HPO4 KH2PO4 NaCl KCl	NaCl KCl Tris-base	NaCl KCl Trise base Tween-20

PBS与TBS有何不同？

从成分上来说，二者最大的区别在于前者用的是磷酸盐缓冲体系，后者用的则是Tris-base体系。PBS中的磷酸盐是二级解离，因此能够配成pH范围更宽的缓冲液，具有盐平衡、调pH等作用，且它的pH受温度、稀释倍数等影响小，但它会和一些重金属离子缔合产生沉淀，还会影响一些生化过程，如抑制部分酶的催化作用；TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液，它对于生化过程干扰很小，也不会和一些重金属离子产生沉淀，但缺点就是pH受环境和稀释倍数会有较大影响。

Tween-20在IHC中的作用？

Tween-20是一种非离子型表面活性剂，有研究表明使用含有Tween-20的缓冲液多次冲洗切片，能够使其均匀覆盖整张切片，如同在切片上增加一层液体膜，不会使得组织和切片空白区形成明显分界线，它还能够使得后续滴加的试剂均匀分散在组织上，避免反复滴加，减少了试剂用量。除了减少试剂用量，Tween-20还是一种非离子型去污剂，能够让组织切片清洁更彻底，有复性抗原的作用，可提高抗体特异性的识别能力。

综上所述，PBS适用于大部分的应用场景，无论是用做洗涤、培养都非常合适，只要避开“雷区”它都能胜任，而用作抗体稀释液的话，等渗缓冲盐溶液TBS对抗体的干扰更小，再进一步若是用于组化的抗体稀释液，则含有Tween-20的TBST是最合适之选。

除了选好基础的缓冲液体系，在组化的抗体稀释液中，往往还添加有封闭试剂，为了辅助提高抗体特异性，减少非特异结合。封闭试剂一般都会选取与二抗同一来源的封闭血清，也可以选用BSA，但从封闭效果来说则不如血清。

如何选择抗体稀释液，看似新手的问题背后其实暗藏玄机，假如您的IHC结果始终欠缺一份完美，不妨试试更换抗体稀释液。

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货号	品名	规格	货期
abs962	1×PBS缓冲液	500ml、500ml*10	现货
abs9340	PBST溶液	500ml	现货
abs9256	TBS 缓冲液	500ml	现货
abs952	10*TBST	100ml、1L（500ml×2）	现货

 

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