胶原酶:解离组织和单层细胞的理想之选
1458 人阅读发布时间:2020-10-13 15:08
| 胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase),可以在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此,它对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。 胶原酶是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml(约为1mg/mL)或0.03%~0.3%。 胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。具体可见下面表格: 几种类型的胶原酶的区别及相关应用
几种类型的胶原酶的活性
影响胶原酶消化组织的因素及解决方案
| 问题 |
原因 |
解决方案 |
| 消化作用不佳 |
酶活性不强 |
在低温干燥条件下储存胶原酶。 |
| 钙离子不足 |
胶原酶溶液分装后冻存。 |
| 胶原酶溶液中钙离子浓度为5 mM。 |
| 酶量不足 |
使用更多的胶原酶。可尝试蛋白酶活性更高的酶混合物。 |
| 解离的细胞被困住 |
破裂细胞的DNA解离 |
减少搅动 |
| 加入DNA酶** |
| 非蛋白胶不足 |
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| 在消化之前充分冲洗组织*** |
| 使用无镁离子的消化液 |
| 加入透明质酸酶 |
| 细胞死亡 |
蛋白酶过量 |
减少蛋白酶接触时间* |
| 加入白蛋白或灭活血清 |
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| pH 改变 |
用缓冲液(例如HEPES)代替HCO-3. |
| 经常检查并重新调节pH |
| 氧气太少 |
给消化液通气(空气或氧气) |
| 用更多的酶加速消化 |
| 细胞产量低 |
酶平衡 |
使用更多的胶原酶* |
| 在胶原酶中加入弹性蛋白酶** |
| 贴壁因子 |
首先灌洗组织以除去钙离子++*** |
| 许多细胞受损 |
过多的蛋白酶 |
减少蛋白酶用量* |
| 加入白蛋白或灭活血清 |
| 物理性损伤 |
非常温和地处理组织和细胞 |
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