多重免疫组化常见问题答疑

1. B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗？

T细胞：CD3、CD4、CD8、FoxP3（再细化还有：GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45）                 
B细胞：CD19 ；
DC细胞：CD8α、CD11b

2. TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤，但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有？

试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程

3. 在指标与染料的搭配以及染色顺序上，有什么规律吗？

并没有一个特别的线性关系，和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系，所以会多因素考虑，多尝试，预实验很重要。

4. 如果我能提供抗体给你们做服务的话，需要的抗体量是多少？

需要的抗体量要根据样本数来，但一般来讲，50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。

5. 我这边提供抗体的话，抗体需要满足什么条件吗？

抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用，各品牌供应商都会提供相应的实验验证的，爱必信组化抗体经过严格实验验证，是不错的选择。

6. 我的组织还有GFP蛋白，给结果的时候能排除干扰吗？

可以的，结果分析的时候可以避免绿色通道，分析软件赋予的颜色是伪彩色，可以更换其他颜色。

7. 多色样本的寄送有条件限制吗？

正常的石蜡切片和组织芯片很稳定，只要防震盒常温运输即可，冰冻切片的话，需要干冰低温运输。

8. 实验用时真的一天能做完吗？

相比普通的组织荧光实验，我们一抗的孵育时间只需室温30min，二抗和信号放大步骤只需孵育10min，能大大节约时间，五色左右可在一天内做完。

9. 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好？

微波修复洗脱更稳定，抗体洗脱液对大多数抗体都管用，难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦

10. 多色用的一二抗各是什么种属？

多色的优势在于一二抗种属无需特别要求，一抗根据样本种属选择既可，二抗根据一抗选择即可，多个抗体组合，种属不会有影响。

11. 染料的选择会影响后染色吗，有共定位的话怎么办

共定位的情况，我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况，染料不会对染色有影响，串色的情况需要预实验做充足，包括抗体稀释比例，染料与放大液比例，修复条件的确定。

12. 抗体修复液每一轮修复都要更换吗？

是的，每一轮都要根据抗体选择相应的修复液

13. 所有操作要避光吗？

不需要，在常规环境下操作就可以，染料的荧光强度很高