爱科研 —— 二抗的选择

二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，根据实验需求，二抗上通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以广泛应用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗针对某一特定物种的所有抗体均具有特异性，因而使用特定标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。
 

二抗，广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同样的，在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从以下几个方面考虑：
 

1.一抗的种属来源

根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。例如：一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。
 

2.一抗的类别亚型

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。单克隆抗体的类别及亚型通常会在产品说明书中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚型的二抗。此种抗体在双标记实验中尤其合适。

3.二抗的偶联标记

一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP）、荧光基团、生物素、金颗粒等。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。WB、ELISA和IHC常用的二抗通常是酶标二抗（部分荧光WB需选用远红外波长荧光蛋白标记的荧光二抗），而免疫荧光、流式等实验中通常使用荧光基团标记的二抗，而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。 还有一些需要更大程度地放大信号的免疫实验中，二抗则可以选择biotin/avidin体系的二抗或无偶联标记的二抗（再用三抗放大）。
 

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