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关于Ficoll，您不得不知的那些事儿
448 人阅读发布时间：2019-03-06 14:39
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如果想简单、快速地分离细胞，大家第一反应肯定是密度梯度离心介质；如果您想分离人淋巴细胞，那当然少不了Ficoll啦。 Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。
 PBMC（Peripheral blood mononuclear cell），外周血单个核细胞，其细胞类型为血液中具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞和单核细胞等，其中淋巴细胞占很大一部分。
爱必信淋巴细胞分离介质Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque）是一种无菌的、即用型的Ficoll-泛影酸钠密度梯度介质，能够简单快速的从少量或大量的人外周血、骨髓和脐带血中高产和高纯度的提纯淋巴细胞。本品内毒素水平非常低，小于0.12EU/mL，分离所得的细胞中95%左右为单个核细胞，细胞存活率大于90%，回收率为60%左右。
Ficoll-Paque分离人外周血PBMC的示意图：
 操作protocol：
01\ 样本准备
将2mL外周血转移到15mL离心管中；
用等量的2mLPBS稀释外周血，注意吹打或颠倒混匀（如需无菌操作请在超净台内完成）；
02\ 分离步骤
在离心管中加入3mL 提前混匀的Ficoll-Paque（无菌操作请用注射器）；
将稀释好的血液样本缓慢加在Ficoll细胞分离液上，保证Ficoll与样本之间界面清晰（注意不要吹打或颠倒混匀）；
离心300g，20℃，20min（注意要设置缓降，不能骤停）；
轻轻移除上层分离液（血浆）；
 爱必信abs930 Ficoll-Paque分离淋巴细胞实验图
03\ 洗涤淋巴细胞
吸取“白膜层”PBMC，将其转移到新的15mL离心管中；
加3-5倍PBS充分混匀；
离心300g，20℃，10min（完全弃去上清，沉淀即PBMC细胞）；
用适量PBS重悬、进行细胞计数（当细胞量＞10E7时，要扩大相应试剂用量）；
离心300g，10min（完全弃去上清）；
备注：
（1）实验操作前，先将Ficoll-Paque和血液样本在室温放置一段时间，保持温度为18℃和20℃；
（2）分离PBMC第一步离心的时候，一定不能设置制动或设置低水平的制动，否则将分层混乱。
产品订购信息：
爱必信特色产品线(全部现货)： 爱必信(上海)生物科技有限公司 联系邮箱：info@absin.cn 公众平台：爱必信生物 |
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