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技术资料/正文
抗体亲和纯化填料解决方案
96 人阅读发布时间：2025-02-18 15:31
一、背景介绍
◆ 蛋白A是⾦⻩⾊葡萄球菌的细胞壁中的表⾯蛋⽩，它由折叠成三螺旋束的五个同源Ig结合域组成；
◆ 蛋白G是G、C型链球菌细胞壁中的⼀种蛋⽩质；
◆ 蛋白A/G是重组蛋⽩A蛋⽩G融合蛋⽩，融合了来⾃蛋⽩A的5个Fc结合域和蛋⽩G的3个Fc结合域；
◆ 蛋白L来源于⼤消化链球菌，并通过L链相互作⽤与免疫球蛋⽩结合。
图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域
表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析
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蛋白A |
蛋白G |
蛋白A/G |
蛋白L |
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优点 |
结合位点在CH2和CH3结构域之间的Fc区域，以及⼈ VH3家族的Fab区内的重链
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可以特异性地同免疫球蛋⽩IgG分⼦的Fc段结合⽽不影响其Fab段与抗原分⼦结合的能⼒ |
可以与⼈的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合。蛋⽩A/G降低了对pH的依赖，允许在pH 5-8进⾏结合 |
只与抗体的κ轻链结合⽽不会影响抗体的抗原结合位点。可以结合更⼴泛的抗体类别，如⼈类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链(⼈类1,3,4型，⼩⿏1型)的Fab、scFv等抗体⽚段 |
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缺点 |
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不能与⼩⿏的IgA、IgM和⾎清⽩蛋⽩结合 |
不结合⽜、⼭⽺或绵⽺来源的免疫球蛋⽩ |
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应用 |
免疫球蛋⽩的纯化、固定或检测领域 |
从⾎清中分离并纯化或去除IgG、单克隆抗体的纯化和抗原抗体复合物的分离等 |
⿏IgG单抗的提取和检测 |
从添加BSA或FCS的培养液中纯化单克隆抗体，也⼴泛⽤于基因改造⼯程化抗体的纯化分离 |
表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和⼒
注：- 表示不包含；+ 表示中标组合；+++ 表示错误组合；NA 表示不适用或数据不可用。
二、抗体亲和纯化填料参数
注：
a：90%体积以上的微球在此粒径范围；
b：DBC10%测试条件为：10%流穿，6min停留时间；
c：推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下2-6min停留时间的使用条件，并非只能在该流速范围内工作；
d：10cm柱高下的最大测试流速。
三、应用数据
图2 工艺溶剂稳定性
图3 不同蛋⽩A填料对NaOH的耐受性
图4 不同蛋⽩G填料的洗脱曲线，样品为h-IgG
图5 填料：重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)(Cat: abs91003-M)；
样品：牛血清，相对于填料约20mg IgG/mL填料；
上样、结合缓冲液： 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV；
洗脱缓冲液：100mM甘氨酸，pH3.0，14CV；
在位清洗(CIP)：100mM NaOH，10CV
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爱必信(上海)生物科技有限公司 联系邮箱：info@absin.cn 微信公众号：爱必信生物 |
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