爱必信(上海)生物科技有限公司
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技术资料/正文
mRNA转染专用利器,让mRNA转染不再难!
72 人阅读发布时间:2023-08-04 16:58
mRNA(信使RNA)转染是一种将外源mRNA引入细胞内的技术,以实现特定蛋白质的表达或基因治疗的方法。mRNA转染可以绕过基因组中的DNA转录和核糖体转录过程,直接将所需的mRNA传递到细胞内,从而实现蛋白质的合成。
使用mRNA转染技术有多种优势:
1)相比于DNA转染,mRNA转染不需要经过核转录和DNA复制等步骤,可以更快速地实现蛋白质的合成;
2)由于mRNA转染不涉及基因组的改变,避免了可能引发的不良基因突变和免疫应答等问题;
3)mRNA转染还具有可调控性强、转染效率高以及适用范围广等优点。
在实际应用中,mRNA转染被广泛用于基因治疗、疫苗研发以及细胞工程等领域。mRNA转染试剂(abs60339)是爱必信推出的专为真核细胞进行mRNA转染开发的mRNA专用转染试剂,可用于在多种贴壁细胞或悬浮细胞中递送mRNA。可直接将mRNA从细胞外传递到细胞质中进行表达,这避免了转录调控作用的影响以及进入细胞核的限制,可被广泛应用于短期蛋白表达的相关研究工作。
产品亮点:
✦ 专用于mRNA转染,可用于多种贴壁细胞或悬浮细胞;
✦ 在各种常规细胞、难转的原代细胞或干细胞中均具有较高的转染效率;
✦ 不受血清影响,转染前后无需更换培养基;
✦ 产品性能稳定,毒性低,操作简单,重复性好。
实验操作步骤:
以24孔板为例:
1)细胞接种:每孔接种0.5-1.0×105个细胞,细胞培养12-24小时,使转染时细胞密度达到60-70%融合度;2)mRNA稀释:将mRNA稀释于Opti-MEM培养基中,终浓度0.1mg/mL;
3)复合物制备:取2uL的mRNA转染试剂原液加入到8uL Opti-MEM培养基中,取4uL浓度为0.1mg/mL的mRNA加入到6uL Opti-MEM培养基中,两者等体积混合;
4)室温静置10分钟;
5)无需等待,每孔20uL复合物加入细胞培养板中,混匀,37℃培养18-48小时后检测基因表达,无需更换培养基。
实验案例展示:
1、适用范围广泛:使用Abisn mRNA转染试剂(abs60339)在不同类型细胞包括293T细胞、B16F10细胞、MCF-7细胞、LX2细胞、MC38细胞、LLC细胞、MDA-MB-231细胞、Jurkat细胞中转染EGFP mRNA,处理细胞24h后利用荧光显微镜拍照,发现Abisn mRNA转染试剂(abs60339)在各类细胞中均取得了较好的转染效果。
图1 mRNA转染试剂(abs60339)转染EGFP mRNA至各种类型类细胞
2、转染效率高:使用Abisn mRNA转染试剂(abs60339)和不同竞品mRNA转染试剂在B16F10细胞中转染EGFP mRNA,处理细胞24h后,利用流式细胞仪检测EGFP mRNA的转染效率。结果表明不同比例的Abisn mRNA转染试剂(abs60339)转染效率均高于竞品转染试剂。
图2 mRNA转染试剂(abs60339)不用转染试剂转染效率对比结果
备注:图例中不同柱子颜色代表转染试剂和mRNA的比例[转染试剂体积(μL):mRNA的质量(μg)],纵坐标的数值代表转染效率。
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备注:所有线性工具RNA均使用 Cap AG结构共转录加帽,修饰碱基5种可任选其一(5-Methoxy-UTP,5-Methyl-CTP,N1-Methylpseudo-UTP,N6-Methyl-ATP,Pseudo-UTP。) |
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