我们辛辛苦苦养好的类器官，该如何做鉴定呢？通常是HE染色和免疫组化染色。今天小编带大家了解一下类器官如何进行包埋及HE染色。

 

一、类器官收集

 

1、类器官收集（例如24孔板，收集1-2孔类器官，大约200-500个类器官）；

2、4℃静置 10min，离心弃去大部分上清。

 

二、琼脂糖凹槽制备

 

1、称量0.2至0.4g琼脂糖，加入至烧杯或者小试剂瓶内；

2、加入10mL左右PBS；

3、微波炉高火融化，每隔5s暂停打开，观察，重复数次至琼脂糖融化完全；

4、取约200uL融化琼脂糖，加入至600uL 1.5ml EP管内（如下图所示）；

5、在盛有琼脂糖的1.5ml EP管内插入一小0.5ml EP管，使琼脂糖形成一圆尖底凹槽，室温或者4℃冰箱静置数分钟，至琼脂糖凝固，轻轻转动小0.5ml EP管，取出0.5ml EP管，可看到琼脂糖内形成一个深圆尖底槽；

6、吸取类器官沉淀置于凹槽底部，尽量包埋在中间位置；

7、加入PBS至高于琼脂糖槽的边缘。

 

三、类器官固定

 

四、类器官包埋

 

1、脱水：取出已凝固的含有类器官沉淀的琼脂糖块，在梯度乙醇中脱水，70%、80%、90%和95%乙醇各1h，100%乙醇30min，待其凝固；

2、融蜡：提前4h左右打开烘箱，65℃溶蜡；

3、透明：将脱水完成后的琼脂糖块转移至组织包埋盒中（二甲苯处理前需一直浸泡在无水乙醇中），将包埋盒转移至二甲苯中5min处理两次；注：因二甲苯有毒性，需在通风良好区域进行操作，取出时尽量沥尽残留二甲苯；

4、浸蜡：透明化处理完成后立即转入已经融化的蜡缸中，60℃浸蜡2h后，更换新的蜡缸再次浸蜡2h；

5、包埋：包埋在冰盒上进行，将融好的纯蜡倒入蜡盒三分之一处，将琼脂块放置于中间位置，然后再滴蜡包埋直到倒满。待蜡块完全凝固后，小心脱下模具。

 

五、类器官HE染色

 

1、石蜡切片脱蜡至水

依次将切片放入二甲苯I 10min；二甲苯Ⅱ10min；无水乙醇Ⅰ5min；无水乙醇Ⅱ5min；95%酒精5min；90%酒精5min；80%酒精5min；70%酒精5min；蒸馏水洗。

 

2、苏木素染细胞核

切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗。

 

3、伊红染细胞质

切片入伊红染液中染色1-3min，自来水洗。

 

4、脱水封片

将切片依次放入95%酒精I 5min ；95%酒精II 5min；无水乙醇Ⅰ5min ；无水乙醇Ⅱ5min ；二甲苯Ⅰ5min ；二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

 

5、显微镜镜检，图像采集分析

 

六、类器官鉴定-HE染色结果（以肺癌为例）

人肺癌类器官HE染色

 

今天讲解就到这了，大家如有类器官包埋及HE染色问题，欢迎入群交流哦！

 

货号	品名	规格
abs44056210	琼脂糖	100g
abs42155596	石蜡	500g
abs962	1×PBS缓冲液	500ml/500ml*10
abs9222	伊红染液	100ml
abs9214	苏木素染液	100ml /500ml
abs9177	中性树胶	100ml/ 100ml×10
abs7119	1.5ml离心管（无菌无酶）	1袋/箱
abs7118	0.5ml离心管（无菌无酶）	1袋/箱
abs9444	Organotial人肝癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9445	Organotial人结直肠癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9443	Organotial人肺癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9449	Organotial人胃癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9447	Organotial人胰腺癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9589	Organotial人鼻咽癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9446	Organotial人乳腺癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9558	Organotial人卵巢癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9590	Organotial人宫颈癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9448	Organotial人子宫内膜癌类器官培养基试剂盒	1kit
abs9739	Organotial人脑胶质瘤类器官培养基试剂盒	1kit
abs9743	Organotial人前列腺癌类器官培养试剂盒	1kit

 

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