鼠尾胶原—细胞的松软“席梦思”

胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分，在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。

胶原蛋白I（Collagen, Type I）是由2个α1 链和1个α2 链组成的异源多聚体（图1），在37℃，中性pH 下自发形成三螺旋骨架，是一种优秀的细胞培养用基质，广泛用于肝细胞、成纤维细胞、脊神经节、肌肉细胞、施万细胞、胚肺细胞、上皮细胞和其他大量细胞系。还能用于研究细胞生长、分化、迁移以及发育过程中的组织形态发生。

图1 胶原蛋白I分子模型

鼠尾胶原蛋白I 是根据Birkedal-Hansen 方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。可用于包被细胞培养器皿，培养细胞表面粘附性，特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞，比如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。还可用于三维胶的制备，模拟真实的生长环境，使得细胞在三维环境中生长。

本品为溶于6mM HAc 的无菌溶液（图2），浓度5mg/ml，每个批次产品皆通过细胞培养测试（包括三维空间培养）以保证质量的可靠性。接下来我们了解鼠尾胶原蛋白I的两种用途吧。

图2 鼠尾胶原蛋白I (abs47014921)
 

组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1-5μg/cm²，起始浓度可首选5μg/cm²。建议根据具体细胞类型来优化。
 

本品以溶于6mM HAc（=0.36g/L HAc）的无菌溶液形式提供，本身不溶于中性pH，建议用6mM HAc溶液做进一步稀释。配制方法：取34.5μl 冰醋酸（17.4M）加入100ml双蒸水，充分混匀后即得到6mM HAc溶液，0.22μm滤膜过滤除菌后待用。
 

a. 以包被浓度为 5μg/cm²，先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如50μg/ml， 然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；

b. 以包被浓度为 2μg/cm²，先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如12μg/ml，然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；

表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表

2）室温孵育1h，小心吸掉多余液体，用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后，在超净台内开盖过夜晾干。无菌条件下，包被好的器皿在4-25°C至少可保存3个月。
 

当鼠尾胶原蛋白I使用浓度>1mg/ml，pH 7.0左右皆可形成具有一定强度的三维胶，建议成胶浓度为1-2 mg/ml。
 

由于本品是以溶于6mM HAc的无菌溶液形式提供，在成胶过程需先加入0.06倍体积的0.1M NaOH中和。
 

10×细胞培养液（依据培养的细胞种类而定）、0.1M NaOH、无菌水（abs9259）
 

b. 将培养器皿在室温（25°C左右）放置20min待胶凝固后，加入适当体积细胞培养液，转移到培养箱中培养。
 

本期讲解就到这里了，如有细胞培养问题，欢迎扫码加入我们微信群交流。
 

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