爱必信(上海)生物科技有限公司
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技术资料/正文
IHC专题——抗原修复
330 人阅读发布时间：2023-02-06 13:18
在样本制备的过程中，往往会应用一些试剂（如多聚甲醛、福尔马林等）对新鲜组织进行处理，这个过程可能导致抗原位点被封闭，为了避免影响后续免疫染色的效果，我们需要先对切片进行抗原修复。对于石蜡切片来说，抗原修复是不可或缺的步骤，常用的方法有酶消化法和热修复法。
作为最早的抗原修复方法，常用的消化酶有三：胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用极易受温度影响，如果消化不足，则无法充分暴露出抗原位点，过度的消化又会破坏组织结构，影响最后阳性信号的判读，因此在后续的发展中，酶消化法渐渐被热修复技术所替代，但对于个别抗原，如免疫球蛋白、补体，以及在甲醛固定、石蜡包埋的肾活检中，酶消化法依旧不可替代。
抗原热修复是采用高温、高压方法配合合适的抗原修复液，使得被固定液封闭的抗原位点重新暴露，提高抗体的阳性检出率。
最常用的抗原修复液有两种：柠檬酸钠缓冲液（pH=6）、EDTA缓冲液（pH=8或9），一般来说一抗的说明书都会写明需要选择哪种修复液。如果说明书没有推荐，柠檬酸钠缓冲液能够适配大部分的抗体，EDTA缓冲液相对修复效果更强，但阳性增强的同时也会提高非特异背景，一些比较难表达的抗体可以选择EDTA缓冲液。
| 热修复方法 |
微波热修复 |
水浴热修复 |
高压热修复 |
| 操作 |
在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于微波炉中高火煮沸，低火维持15min后取出染色盒，冷却至室温 |
在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于水溶锅中加热，其间不断用温度计测其温度，待抗原修复液的温度达到有效温度（92℃↑），维持40min后取出染色盒，冷却至室温 |
在染色盒中加入抗原修复液，放入切片，置于高压锅内加热至饱压后继续加热5min，关闭电源，10min后取出染色盒，冷却至室温 |
| 优点 |
加热的时间和温度都可以有所调整 |
温和，均匀，不易脱片，对组织形态结构影响少 |
受热均匀，暴露抗原位点效果好，受环境条件影响小，可重复性高 |
| 缺点 |
时间长，修复液容易蒸干，需要及时观察补充；受热容易不均匀，沸腾易导致脱片；不同微波炉功率有差异，难以标准化 |
需要较长时间；染色盒材料不同，热传导性不同，会影响加热效果，容易出现抗原表达弱、阳性率低的结果 |
易导致脱片；使用高压锅要小心蒸汽烫伤，使用要规范谨防锅内蒸汽过饱和引发事故 |
小爱温馨提示，没有哪一种抗原修复液或者修复方法能够适配所有的抗体和样本，最佳条件还是需要在摸索实践中确定哦！
任选5件，即享八折！！！
| 分类 |
货号 |
品名 |
规格 |
货期 |
| 固定 |
4%多聚甲醛/通用型组织固定液 |
500ml |
现货 |
|
| 抗原修复 |
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×) |
100ml |
现货 |
|
| 冰冻切片快速抗原修复液(5×) |
100ml |
现货 |
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| 细胞爬片抗原修复液（1X） |
100ml |
现货 |
||
| EDTA抗原修复液(50×) |
100ml |
现货 |
||
| Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0) |
100ml |
现货 |
||
| 柠檬酸钠抗原修复液(50×) |
100ml |
现货 |
||
| 胃蛋白酶抗原修复液 |
100ml |
现货 |
||
| 细胞通透（胞内指标） |
Triton X-100/曲拉通X-100 |
100ml/500ml |
现货 |
|
| 淬灭 |
过氧化物酶封闭液(H2O2法) |
100ml |
现货 |
|
| 吐温-20 |
500ml/2.5L |
现货 |
||
| 封闭 |
Goat serum |
10ml/50ml |
现货 |
|
| 驴血清 |
50ml |
现货 |
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| 牛血清白蛋白 (BSA) |
100g |
现货 |
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| 一抗 |
多指标IHC专用一抗（CD3、CD8、CD4、FOXP3、KI-67......） |
1-2周 |
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| 一抗二抗稀释液 |
100ml/1L |
现货 |
||
| 二抗 |
现货 |
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| HRP二抗 |
现货 |
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| 显色液 |
DAB 显色试剂盒（棕黄色，IHC） |
1kit |
现货 |
|
| DAB 显色试剂盒（蓝紫色，IHC） |
1kit |
现货 |
||
| 复染（可选） |
改良型Mayer's苏木素染液 |
100ml/500ml |
现货 |
|
| 封片（DAB显色） |
中性树胶 |
100ml |
现货 |
|
| 缓冲液 |
1×PBS缓冲液 |
500ml/500ml*10 |
现货 |
|
| 10*TBST |
100ml/1L |
现货 |
||
| PBST(1×,pH7.4) |
500ml |
现货 |
||
| 组化笔 |
PAP Pen 组化笔 |
1支 |
现货 |
|
Absin特色产品线：
WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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